肺は酸素の取り込みと二酸化炭素の体外排出を担う重要な臓器です。正常な身体機能を維持し、代謝を支えるために不可欠な存在です。肺の研究には、組織切片が不可欠です。組織切片は薄く平らなサンプルで、簡単にスライスして顕微鏡で観察することができます。肺の組織切片により、ガス交換、免疫反応、肺の発達など、さまざまな肺機能の根底にある細胞や分子のメカニズムを調べたり、喘息、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、肺がんなどの肺の病気や障害で起こる変化を特定したりすることができます。
Compresstome®ビブラトームの利点
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組織損傷が最小限: アガロースが空隙を埋める一方、圧縮により組織を安定させ、滑らかな切片を得ることができます。
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滑らかな切片:組織の安定化=アーチファクトなし
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潰れない:アガロースが空隙を埋めるため、潰れることがありません。
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使いさすさ:多くの研究室ではCompresstomeによって1回目または2回目で多くの生細胞を含むスライスを得ることができます。
従来の振動ミクロトームの問題点
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繊細な構造:肺組織はデリケートな構造をしているため、切片作製時にダメージを受けやすく、切片の質が悪くなることがあります。また、振動ミクロトームの刃が組織を裂いたり、潰したりすることがあり、使用可能な切片を得ることが難しい場合があります。
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組織密度のばらつき: 肺は密度の異なる複数の細胞から構成されているため、均一な切片を作成することが困難な場合があります。肺の高密度領域では、ビブラトームの刃が飛んだり、切片の厚みが不均一になったりすることがあります。
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空隙の存在:肺には気腔があり、切片作製中に組織が潰れたり歪んだりすることがあります。このため、組織構造を代表する切片を得ることが困難になることがあります。
Compresstome®
Compresstome® は、米国で最も広く使用されている組織スライサーで、精密にカットされた肺のスライスを作成し、呼吸生理学の研究に適した健康な組織を提供します。肺の解剖学的構造や微細構造の研究のために、Compresstome® 組織スライサーは肺組織を4µmまで薄く切片化することができます。固定した肺スライスは、免疫組織化学(IHC)、in-situ hybridization(ISH)、H&E染色に使用できます。
肺の組織切片作製 - 推奨モデル
VF-510-0Z
振動ミクロトームCompresstome® VF-510-0Zは特許取得済みの圧縮技術によりビビリ・チャタリングなしで切片を作製し、急性組織上の多くの生存細胞を維持。良質な実験結果を保証します。
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従来のビブラトームの5倍の速さで切開し、ブレードを組織に当てる時間を短縮し、より良い切開を実現
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Auto Zero-Zテクノロジーにより、Z軸のたわみを1 µm未満に低減
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持ち運びに便利な軽量設計
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完全自動化:切開+厚み調整
研究室での実例
免疫療法研究におけるCompresstome®の使用
Astero Klampatsa博士(PhD)は、英国ロンドンがん研究所がん免疫療法のチームリーダーであり、英国キングス・カレッジ・ロンドンの上級講師です。中皮腫と肺癌に対する新規CAR T細胞療法の開発、および免疫療法に対する反応マーカーを同定するためのこれらの悪性腫瘍の免疫生物学に焦点を当てています。このウェビナーでは、Klampatsa博士が、Compresstome®を用いて、免疫療法研究のための生体外モデルとしてプレシジョンカット腫瘍スライス(PCTS)をどのように作成したかについて説明しています。
免疫学と感染症:Compresstome® による精密切断肺スライス
Compresstome® は、精密切断肺スライス(PCLS)の作製に、世界中の研究者に広く使用されています。Compresstome® では、スライス前にアガロース包埋を行うことで、肺胞を開存させ、組織のコンプライアンスを向上させることができます。動画内では、肺の様々な免疫細胞の局在を可視化するために、Compresstome®でPCLSを切片化して免疫染色を行っています。このプロトコルは、様々な条件下で多くの異なる細胞タイプの位置と機能を可視化するために拡張することができます。
腫瘍のスライス:肺腫瘍スライス培養の試みからの考察
Tsilingiri博士は腫瘍免疫療法に取り組んでおり、Compresstome振動ミクロトームを使って、スライス培養における腫瘍組織と自己リンパ節細胞との相互作用を調べています。この研究は、EUが資金提供するコンソーシアムTumour-LNoC(Tumour-Lymph node on a chip)の枠組みの中で行われており、最終的な目標は、チップ上で転移プロセスを模倣し、転移細胞をリアルタイムでモニターすることです。
精密切断肺スライス(PCLS): 肺疾患研究のための新しい生体外モデル
Koziol-White博士は、約20年にわたり気道機能研究のために開発・利用し てきた精密切断肺スライスシステムの多用途性を紹介しています。
肺線維症のメカニズムを探るための精密切断肺スライス(PCLS)
Claudia Loebel博士の研究は、肺損傷と線維化における初期上皮細胞分化のメカニズムを探るためのPCLSの開発に関わっています。
肺胞損傷後の幹細胞行動の時空間的協調性
Chioccioli 博士
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肺における新たな傷害応答メカニズムとしての肺胞幹細胞の運動性を記述し、幹細胞の運動性の特性を高い細胞分解能で明らかにしました。
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肺胞内および肺胞間の移動を含む、傷害後のAT2細胞の初期の非常に動的な挙動を説明しました。
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AT2幹細胞の傷害応答に伴う、少なくとも3つの異なるAT2細胞の形態動態の出現を明らかにしました。
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低分子を用いてRho-associated protein kinase(ROCK)経路を阻害すると、傷害後のAT2幹細胞の運動性が有意に低下し、中間前駆細胞のマーカーとして知られるKrt8の発現が低下することを示しました
論文
Kim JH, Schaible N, Hall JK, Bartolák-Suki E, Deng Y, Herrmann J, Sonnenberg A, Behrsing HP, Lutchen KR, Krishnan R, Suki B. Multiscale stiffness of human emphysematous precision cut lung slices. Sci Adv. 2023 May 19;9(20):eadf2535. Epub 2023 May 19. PMID: 37205750; PMCID: PMC10198632. PDFダウンロード
Lam M, Lamanna E, Organ L, Donovan C, Bourke JE. Perspectives on precision cut lung slices-powerful tools for investigation of mechanisms and therapeutic targets in lung diseases. Front Pharmacol. 2023 May 16;14:1162889. PMID: 37261291; PMCID: PMC10228656. PDFダウンロード
Kim SY, Mongey R, Griffiths M, Hind M, Dean CH. An Ex Vivo Acid Injury and Repair (AIR) Model Using Precision-Cut Lung Slices to Understand Lung Injury and Repair. Curr Protoc Mouse Biol. 2020 Dec;10(4):e85. doi: 10.1002/cpmo.85. PMID: 33217226. PDFダウンロード