使用方法
1.事前準備
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Tissue Clearing Solution は‐20℃で保管する。（Mounting Solutionは常温でOK）
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Tissue Clearing Solution は2時間前には、37℃に解凍しておく。
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脳サンプルの脱水のため、Sucrose (30%) を加えた、1X PBS を準備しておく。
※脳以外のサンプルには Sucrose は不要です。
※Tissue Clearing Solution と Mounting Solution は結晶化または沈殿していることがあります。
その際は使用前に 37 °C で 1 ～ 2 時間インキュベートしてください。
2.サンプル準備
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サンプルは PFA(4%) で灌流固定を行う。
※脳の場合は、組織を強固にするため、PFA(4%) に Sucrose(10%) を入れることを推奨する。 -
サンプルを PFA(4%) に浸けて、一晩インキュベーション（4℃）する。
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サンプルを、4℃ の 1X PBS で振とう洗浄する（20分 x 3セット）
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4℃ の 1X PBS に 10ml の Sucrose（30%）にサンプルを入れ、サンプルが沈むまで待つ。（サンプルによりますが、数時間から一晩かかります）
※脳以外のサンプルは Sucrose は不要です。
3.サンプルの透明化
（脳の場合）
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サンプルを固定液を取り出し、フィルターペーパーの上に置き、水分を取る。
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Chamber に厚み 2㎜ のスポンジとフィルターペーパーを敷き、その上にサンプルを入れる。
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嗅球を下に向け、Chamber の赤いコネクター側に向け、Chamber に入れる。
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上からスポンジで軽く固定する。
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Tissue Clearing Solution (20ml) を Chamber に注ぐ。
（脳以外の場合）
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サンプルを固定液を取り出し、フィルターペーパーの上に置き、水分を取る。
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Chamber に厚み 2㎜ のスポンジとフィルターペーパーを敷き、その上にサンプルを入れる。
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サンプルを専用ケージにセットし、Chamber に入れる。
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Tissue Clearing Solution (20ml) を Chamber に注ぐ。
4.Rapid システムの使用方法
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プラグを差し込み、電源を入れる。
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装置のセルフチェックが始まり、5 から 0 になったら完了。
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装置の蓋を開ける。
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Chamber を装置の電極部分に、ゆっくり水平に差し込む。
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装置の蓋を閉める。
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装置のダイヤルを回し、時間をセットして、ボタンを押してスタート。
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正常に作動すると、Chamber 内に泡が見ます。
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装置の Display の SV の表示が点滅したら、完了。
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装置の蓋を開け、Chamber をゆっくりと水平に取り出す。
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スポンジ、または Cassette を取り出し、サンプルを取り出します。
※サンプルに気泡が含まれていたら、3000rpm 24度で1分間、遠心分離をかけてください。
5.顕微鏡での観察
後処理
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透明化後、サンプルを 4℃ の蒸留水に入れて、50rpm で1分間振とうさせ、洗浄します。
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組織核染色液（例：DAPI 20~40ug/ml 蒸留水）を加え、4℃ で一晩振動させます。
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4℃の蒸留水で、50rpm で撹拌洗浄する。（10分 x 3セット）
観察準備（封入）
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チューブに Mounting Solution (20ml) を入れ、サンプルを入れ、キャップを締める。※Mounting Solution の反射率は、1.51 となります。
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37℃ にして、50rpm で振とうする。（24~48時間）
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スライドチャンバーにサンプルを入れ、Mounting Solution を取り出す。
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ラベルテープで、スライドチャンバーをシールする。
6.洗浄方法・サンプル保管方法
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Chamber、Cassette 共に、水道水で濯ぐ。
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Tissue Clearing Solution、Mounting Solution は共に、普通に排水で問題ありません。
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観察後のサンプルは冷蔵ではなく、常温で保管ください。
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処理後、7日以内に Imaging にご使用ください。
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備考 - Rapid Systemおよび試薬は、パッシブタイプの試薬（HRTC-xxx、SHMS-xxx、HRMO-xxxなど）には使用できません。
購入推奨品
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Binaree - 製品ラインナップ
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Binaree Tissue Clearing法用に最適化された溶液で、反射指数（RI）は1.46です。特に、内因性蛍光や免疫標識組織をクリアリング・透明化する際の蛍光保持性に優れています。
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