リンパ節の組織切片作製

リンパ節は小さな豆のような形をした構造で、リンパ液をろ過し、細菌やウイルスなどの異物を捕捉することで、免疫システムにおいて重要な役割を果たしています。リンパ節にはリンパ球やマクロファージなどの免疫細胞が存在し、有害な病原体を識別し破壊するのに役立っています。リンパ節の研究には、組織切片が必要となります。組織切片は薄くて平らなサンプルであるため、簡単にスライスして顕微鏡で観察することができるからです。これにより、抗原提示、T細胞の活性化、抗体産生など、さまざまな免疫機能の根底にある細胞や分子のメカニズムを調べたり、リンパ腫やリンパ浮腫などのリンパ系障害で起こる変化を特定したりすることができます。

Compresstome®ビブラトームの利点

より多くの生きた細胞：圧縮により組織が安定し、より多くの生きた細胞が得られます。
優れた形態：組織の安定化により、組織の構造的完全性が保たれます。
滑らかな切片：組織安定化＝アーチファクトなし
高速：圧縮による組織の安定化により、切片作製が格段に速くなります。
メンテナンスが簡単：オートZero-Zは、キャリブレーション不要のZero-Zを意味します。
使いさすさ：多くの研究室ではCompresstomeによって1回目または2回目で多くの生細胞を含む非常に滑らかなスライスを得ることができます。

従来の振動ミクロトームの問題点

組織の質感の多様性：リンパ節には線維性結合組織、リンパ組織、血管などさまざまなタイプの組織があり、その質感や密度は異なることがあります。このようなばらつきにより、従来のビブラトームでは均一な切片を作成することが困難であり、高密度な領域では刃が飛んだり、切片の厚みが不均一になったりすることがあります。
デリケートな構造の存在：リンパ節には、リンパ洞やリンパ濾胞のようなデリケートな構造がいくつかあり、切片作製時に損傷しやすいです。ビブラトームの刃がこれらの構造を破ったり、くしゃくしゃにしたりして、切片が使用できなくなったり、歪んだりすることがあります。
組織のもろさ：リンパ節組織はもろく破砕しやすいため、高品質の切片を得ることが困難な場合があります。従来のバイブラトームによる切片作製では、組織が断片化したり、不均一な切片や歪んだ切片が得られることがあります。

Compresstome® 振動ミクロトーム

実験の質は、組織切片の質に左右されます。Compresstome® 振動式ミクロトームは、他の振動式ミクロトームと比較して、免疫組織化学用の薄切片をより安定的に、より信頼性高く作製できることが科学的に証明されています。

Compresstome® の振動ミクロトームは、以下のような方法で、ビビリ痕のない安定した厚さの組織切片を作成します。

360度のアガロース包埋により、切断プロセス中に脳組織を安定化させる。
高速スライスを可能にすることで、連続切片作製の時間を短縮します。
高周波振動メカニズムにより、ビビリマークを低減または除去。
特許取得のAuto Zero-Z®テクノロジーにより、カッティングブレードのZ軸方向のたわみをなくすことで、ビビリマークを低減。

Compresstome® 振動式ミクロトームと他社製振動式ミクロトームで切断した組織切片の比較画像

Compresstome® 振動式ミクロトームと他社製振動式ミクロトームの切片の比較（A, C）。他社製ビブラトームで同じ切削速度と振動で組織スライスを作製した場合、組織スライスの表面にビビリマークが発生している。

リンパ節 - 推奨モデル

VF-510-0Z

振動ミクロトームCompresstome® VF-510-0Zは特許取得済みの圧縮技術によりビビリ・チャタリングなしで切片を作製し、急性組織上の多くの生存細胞を維持。良質な実験結果を保証します。

従来のビブラトームの5倍の速さで切開し、ブレードを組織に当てる時間を短縮し、より良い切開を実現
Auto Zero-Zテクノロジーにより、Z軸のたわみを1 µm未満に低減
持ち運びに便利な軽量設計
完全自動化：切開＋厚み調整

VF-510-0Z

研究室での実例

免疫療法研究におけるCompresstome®の使用

Astero Klampatsa博士（PhD）は、英国ロンドンがん研究所がん免疫療法のチームリーダーであり、英国キングス・カレッジ・ロンドンの上級講師です。中皮腫と肺癌に対する新規CAR T細胞療法の開発、および免疫療法に対する反応マーカーを同定するためのこれらの悪性腫瘍の免疫生物学に焦点を当てています。このウェビナーでは、Klampatsa博士が、Compresstome®を用いて、免疫療法研究のための生体外モデルとしてプレシジョンカット腫瘍スライス（PCTS）をどのように作成したかについて説明しています。

組織中の抗原特異的CD8 T細胞のin situ MHC-tetramer染色と定量分析

新鮮な組織は、組織の種類や動物の成熟度（有髄化）などの様々な要因によって、切断の難易度が大きく異なります。他の振動型ミクロトームでは、高度に有髄化した組織や非常に柔らかい新生児組織を扱うのに苦労することがよくあります。圧縮効果に加え、複数の調整ポイント（速度、振動、アガロース濃度）により、「切断が困難な」組織をよりうまく扱うことができます。Compresstome®は、単に他社製品より薄く切断できるだけでなく、細胞表面構造を保持し、死滅細胞数に対して健全細胞数を増加させる、より質の高い切断が可能であることを示す証拠であると確信しています。ミネソタ大学の研究者たちは、抗原特異的CD8 T細胞の位置を特定し、定量し、表現型を決定するために、Compresstome® を用いて生きた組織を切開しています。

腫瘍のスライス：肺腫瘍スライス培養の試みからの考察

Tsilingiri博士は腫瘍免疫療法に取り組んでおり、Compresstome振動ミクロトームを使って、スライス培養における腫瘍組織と自己リンパ節細胞との相互作用を調べています。この研究は、EUが資金提供するコンソーシアムTumour-LNoC（Tumour-Lymph node on a chip）の枠組みの中で行われており、最終的な目標は、チップ上で転移プロセスを模倣し、転移細胞をリアルタイムでモニターすることです。

論文

Hu KH, Eichorst JP, McGinnis CS, Patterson DM, Chow ED, Kersten K, Jameson SC, Gartner ZJ, Rao AA, Krummel MF. ZipSeq: barcoding for real-time mapping of single cell transcriptomes. Nat Methods. 2020 Aug;17(8):833-843. Epub 2020 Jul 6. PMID: 32632238; PMCID: PMC7891292. PDFダウンロード

Li S, Folkvord JM, Kovacs KJ, Wagstaff RK, Mwakalundwa G, Rendahl AK, Rakasz EG, Connick E, Skinner PJ. Low levels of SIV-specific CD8+ T cells in germinal centers characterizes acute SIV infection. PLoS Pathog. 2019 Mar 21;15(3):e1007311. PMID: 30897187; PMCID: PMC6445460. PDFダウンロード

Webb GM, Li S, Mwakalundwa G, Folkvord JM, Greene JM, Reed JS, Stanton JJ, Legasse AW, Hobbs T, Martin LD, Park BS, Whitney JB, Jeng EK, Wong HC, Nixon DF, Jones RB, Connick E, Skinner PJ, Sacha JB. The human IL-15 superagonist ALT-803 directs SIV-specific CD8<sup>+</sup> T cells into B-cell follicles. Blood Adv. 2018 Jan 23;2(2):76-84. PMID: 29365313; PMCID: PMC5787870. PDFダウンロード

論文リスト

プロトコル

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