タイムラプスイメージング
オレンジサイエンスは、ライフサイエンスの中でも細胞生物学分野に関する研究機器に特化して販売およびサポートをしている会社です。
このページでは、タイムラプスイメージングについて、タイムラプスイメージングとはどんな観察手法かをご説明し、当社が扱うタイムラプスイメージングシステム「Lumascope」を例に、タイムラプスイメージングの撮影例、タイムラプス撮影に使用されるソフトウェアや分析ツール、タイムラプスイメージングシステムの使い方をご紹介します。
タイムラプスイメージングとは
タイムラプスイメージングとは、数秒や数分など、一定の間隔ごとに連続した画像を撮影し、観察対象の動きを長時間で撮影する撮影手法です。
撮影された画像は、コマ送りの動画のように再生でき、長い時間軸での観察や分析に有効です。
細胞研究や再生医療などのヘルスケア分野で活用がすすみ、インキュベータ内でタイムラプスイメージングが可能なシステムも多く、細胞を培養しながらイメージングを行うことが可能になっています。
タイムラプスイメージングにはイメージング機器が用いられます。タイムラプスイメージングで画像を撮影することで、これまでは観察が難しかった細胞の動きを画像として観察することができ、形態観察に加え、細胞の長期に渡る動きの分析なども行うことができます。
また、インキュベータ内で観察を同時に行うことで細胞の外部環境を変化させることなく観察を実行でき、長時間の培養をしながらの観察ができるようになりました。例えば、胚発生におけるさまざまな段階で細胞周期の長さを測定し規則的ではない切断を特定したり、細胞にイベントが発生するタイミングを分析したりといったことが可能になりました。
タイムラプスイメージングの撮影例
マウス着床前胚発生
（LS620 対物x20（オリンパス製）で撮影）
東京大学農学生命科学研究科
応用遺伝子学研究室でLS620を採用頂きました。
エレクトロポレーション(電気穿孔法):
脂質生成間葉幹細胞のための持続可能な細胞生物学保存細胞ラベリング論
Kathrin von der Haar 氏他
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30944770
エタルーマ社のインキュベーター蛍光顕微鏡LumaScope600（40倍の対物レンズ使用）で撮影されたエレクトロポレーションをされたAD-hMSCのeGFP発現
内皮細胞はSiM Pore’s のナノ多孔性シリコン窒化物膜上で24時間以上培養されました。採取後すぐのヒトの好中球をシリコン膜の上部から灌流し、強力な化学誘引物質(fmlp)をシリコン膜の下層チャネルに加えたものです。
この位相差ビデオは、Etaluma LS560を使用し、１分間に10フレームを30分以上の間撮影したものです。二種類の色は膜の上下を示しています。
ビデオ提供:ロチェスター大学McGrath研究室 分析:DRVision Quyen Tran
コラーゲンマトリックス(3Dコラーゲン発芽アッセイ)に埋め込まれたヒトのスフェロイド黒色腫 (メラノーマ)。個々の細胞がスフェロイドから出ようとしているのが見えます。コラーゲンマトリックスへの腫瘍の浸透／運動性を測定しています。タイムラプスはインキュベーター内のLS720自動蛍光顕微鏡で撮影したものです。
提供:ドレクセル大学Ed Hartsough研究室
卵母細胞の成熟過程における殺虫剤の影響について
Xiang-Shun Cui 氏他曰く、”フィプロニルは、ブタの卵母細胞の生体内での成熟期に、アポトーシスや細胞周期の進行停止を促進します。”
https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs10495-019-01552-w
タイムラプスイメージングのソフトウェア
タイムラプス撮影が可能なライブセルイメージングシステムには通常ソフトウェアが付属しており、ソフトウェアを使用してタイムラプス動画を編集できます。
オレンジサイエンスが扱う「Lumascope」には、USBで画像をコンピュータに直接送信するLumaviewソフトウェアが付属しております。
ソフトウェアにより、数秒、数分、数時間、数日にわたるタイムラプス画像を取得できます。
そして、ライブビデオは毎秒最大30フレームで録画が可能です。
長時間のデータ収集が可能となり、説得力のあるデータ、資料が作成できます。
細胞研究をより正確に行うことができ、研究をより柔軟に行うことができるようになります。
非常にコンパクトなため、インキュベーター、安全キャビネット、ワークステーションなどの限られたスペースでの観察画像撮影が可能です。
モデルにより、自動ステージ、外部からのリモート操作、イメージモニタリングも可能で、位相差オプションで位相差観察を強化できます。
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タイムラプスイメージングの分析
タイムラプスイメージングで撮影された画像はソフトウェアを使用し2Dや2D + Timeデータセットを分析できます。
最先端の画像処理アルゴリズムによって、細胞、核、粒子などの対象物の強調、検出、追跡が可能です。
例えば、Lumascopeに付属するLumaquant 7.7ソフトウェアには、2Dレシピが搭載されており、DRVisionの*強力なPixel Classifierを使用してデータを総合的に分析し、広範な形態、強度、動き、および系統の測定値にアクセスすることができます。
より簡単で迅速な画像分析が可能です。
ソフトウェアによる分析例
Calcium Oscillation
Cell Proliferation
Cell Tracking
Nuclei Tracking
Particle Tracking
Phase Cell Tracking
Wound Healing
Cell Count
タイムラプスイメージングシステムの使い方
ここではオレンジサイエンスが取り扱う「Lumascope」を例にタイムラプスイメージングシステムの使い方をご説明します。
Lumascopeはインキュベーター、安全キャビネット、環境制御ワークステーションなどの限られたスペースの中で使用できる小型蛍光顕微鏡タイムラプスイメージングシステムです。
お使いのコンピューターとUSDで接続するだけで、数分でセットアップでき、即座に使用が可能です。
下記の順でセットアップを行います。
1. Lumascope本体、パソコン、ソフトウェア、対物レンズを事前に準備します。
2. Lumascope本体に対物レンズをセットし、USBケーブルでLumascope本体とパソコンを接続しソフトウェアを立ち上げます。
以上の手順で簡単にセットアップができ、観察準備が整います。
タイムラプスイメージングシステムの撮影例
細胞観察分野では、個々の画像の観察キャプチャや３色蛍光、単色蛍光、位相差などの合成画像、タイムラプスシリーズ画像作成およびタイムラプスビデオへの編集、ライブビデオ録画などの画像・動画が用いられます。
鮮明な画像が簡単に記録でき、蛍光顕微鏡による細胞観察を容易にしています。
下記リンクより、Lumascopeを用いた観察例動画、画像、研究者の方々が撮影した撮影画像例をご覧いただけます。
タイムラプスイメージングシステムの撮影対象
蛍光顕微鏡は観察対象は幅広く、身体内や動植物のあらゆる組織や細胞、核、細胞膜、細胞小器官、特定のタンパク質、細菌などの観察に用いられます。主に研究用途として用いられる細胞としては、ips細胞、心臓、血管、皮膚、筋肉、肺、腱、靭帯、軟骨、骨の細胞や骨肉腫の細胞、癌細胞、心筋細胞、平滑筋細胞、骨格筋細胞、血管前駆細胞、血管内皮細胞、乳房細胞、幹細胞、脂肪、上皮細胞、線維芽細胞、酵母細胞、軟骨細胞、骨芽細胞、リンパ球などの身体内のあらゆる細胞や組織の研究、再生医療に関する研究に用いられます。
タイムラプスイメージングコンテンツ
オレンジサイエンスでは、蛍光顕微鏡の用語集、ライブセルイメージングについてのページ、蛍光顕微鏡に関するFAQなど、蛍光顕微鏡に関するコンテンツをご用意しております。
タイムラプスイメージング - Lumascope
Etaluma Microscope
インキュベーター内で使用できる
３色蛍光ライブイメージング顕微鏡
エタルマのLumascope（ルマスコープ）は、優れた感度、解像度、ゼロピクセルシフトを備えた、半導体光学の新しいコンセプトで設計された、倒立型小型蛍光顕微鏡です。
そのコンセプトのデザインにより、インキュベーター、ドラフトチャンバーなどの限られたスペースの中で使用でき、幅広いラボウエアでのライブセルイメージングを可能にします。
コンパクトデザインによりインキュベーターやワークステーション内で使用可能
A Dramatic New Concept
インキュベーター内で使用できる小型蛍光顕微鏡
Lumascopesは、従来の高価な顕微鏡に匹敵する高解像度画像を備える、用途の広い、コンパクトな倒立型蛍光顕微鏡で、日々顕微鏡を使用する科学者によって考案、設計されました。従来の倒立顕微鏡は非常に高価で、複雑で、不要な機能も多く搭載していましたが、 Lumascopeは、高画質、汎用性、小型化、使いやすさ、低価格を実現しました。
LumascopesはLED光源、Semrockフィルター、最先端の光学技術、CMOSセンサーにより、回折限界に近い解像度画像（理論上）の提供を可能にします。USBでPCと接続することにより、画像、タイムラプス、動画の取り込みが非常に簡単です。そして、非常にコンパクトなので、インキュベーター、安全キャビネット、ワークステーションなどの限られたスペースでの作業が可能で、モデルにより、外部からのリモート操作、イメージモニタリングが可能です。
Lumascopesは、手動XYステージ、または自動ステージを備えており、汎用のマイクロプレート、フラスコ、ディッシュ、カスタムラボウェアに対応しています。 USBで画像をコンピュータに直接送信するLumaviewソフトウェアが付属しているため、オンボードでの画像保存、処理が不要になり、コンパクト化を実現しました。 Lumaviewは、数秒、数分、数時間、または数日にわたるタイムラプス観察を可能にし、ライブビデオは毎秒最大30フレームで録画が可能です。
BPAE cells
BPAE cells stained to show nuclei (blue), alpha-tubulin (green), and F-actin (red) on an LS 620; LifeTech FluoCells slide #2; 40x Olympus objective.
多彩なアプリケーション・汎用性
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ライブセルイメージング
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細胞増殖、コンフルエンス
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細胞移動、創傷治癒
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トランフェクション効率の決定
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タンパク質発現のトラッキング、定量化
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細胞分化観察
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含有分析
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生体内調査
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AC電源不要顕微鏡撮影
ベネフィット
LED光源とCMOSセンサーを高度な光学技術で顕微鏡に応用し、理論上最大値付近の解像度を得ています。お使いのラップトップにUSBで接続して使用し、動画やタイムラプスも取り込めます。システムを極力単純化したために、これまでの顕微鏡では考えられない丈夫な構造です。また、光源が弱くても十分な光度が得られているため、光が与える細胞への損傷や蛍光減衰が極力抑えられます。
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レンズ着脱式（1.25~100倍対応！）
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オリンパスレンズ使用可能（高画質）
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培養インキュベーター内に収まる設計
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回折限界付近の高解像度
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3色（赤、青、緑）蛍光
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位相差観察のオプション有
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自動ステージモデル有
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フィルタープロファイル
堅牢性
Lumascopeはグローバルで600台近く販売されておりますが、人為的な故障も含め、不具合はほとんど報告されておりません。
下記動画はドロップテストの様子です。通常の使用で考えられる約１ｍの高さからの落下した後でも、正常に動作しているのがお分かり頂けます。
また、通常のインキュベーター内での使用はもちろん、90度の過酷な環境化でも数日間使用できた実績もございます。
ユーザーボイス
Alex Zambon
Pharmaceutical Sciences
「タイムラプスイメージングからの定量的データにより、単一細胞の細胞シグナル伝達について、前例の無い洞察を得ることができます。 今まで、この分野の進歩の阻害要因は、従来のライブイメージングシステムのコストにありました。 しかし、LS720により、低コストで多色ライブセルレポーターからリアルタイムのデータを得ることができるようになり、単一時点で異種細胞集団にわたる平均シグナルを測定する高価なELISAベースの壊れた細胞アッセイから、経時的に単一細胞分解能で本質的に自由なデータポイントを取得することに切り替えることができました。 また 、電動ステージとマルチウェルフォーマットのおかげで、もうプレートリーダーを使う必要はありません。」
R. Zucker
Neurobiology Division
「1200ピクセルのフレームサイズと20倍の対物レンズを搭載したLS 620は、標準のキセノン、ハロゲン、または白熱照明を使用した顕微鏡で見たものよりも、はるかに明るく、均一な照明を提供します。 」
Stanford University
Stary Neuroscience Lab
「Lumascopeによって、はるかに高価な顕微鏡（よく知られているメーカー製）でも不可能だった低明度の蛍光ラベリングを解決することができました！」
ソフトウェア
Lumaview
Lumaviewには、個々の画像のキャプチャ、３色蛍光や１色蛍光、位相差などの合成画像、タイムラプスシリーズおよびタイムラプスビデオへの編集、ライブビデオなど様々な機能があります。現在下記の2つのLumaviewバージョンがあります。
○Lumaview 720/600シリーズ(LS720、LS620、LS600)
○Lumaview 500/400シリーズ(LS520 / 500、LS420 / 400)
デスクトップとラップトップのどちらでも使用いただけます。動作環境はWindows 7、8、8.1、10です。各Lumaviewバージョン用のユーザーガイド（完全版）はソフトウェアのヘルプセクションをご覧ください。Lumaviewのスタートアップガイドはダウンロードページからご確認いただけます。
Lumaquant
Lumaquantは、蛍光顕微鏡や位相差顕微鏡、明視野顕微鏡で取得した2Dや2D + Timeデータセットを分析するのに非常に優れています。
最先端の画像処理アルゴリズムによって、細胞、核、粒子などの対象物の強調、検出、追跡が可能です。
新しいLumaquant 7.7には、Lumaquantのすべてバージョンの2Dレシピが搭載されています。
DRVisionの*強力なPixel Classifierを使用すると、より簡単で迅速に画像分析が可能です。
また、データを総合的に分析し、広範な形態、強度、動き、および系統の測定値にアクセスすることができます。
Calcium Oscillation
Nuclei Tracking
Wound Healing
Cell Proliferation
Cell Tracking
Particle Tracking
Phase Cell Tracking
Cell Count
タイムラプスイメージングシステムのサイズ
コンパクトなデザインのため、細胞培養インキュベーター、組織培養フード、および環境ワークステーション内での使用が可能です。Lumascopeの高さや奥行きに関しては、下記の画像をご確認ください。
タイムラプスイメージングFAQ
どのようなモデルがありますか？
3色蛍光モデル（LS620）、3色蛍光モデル（LS820）、3色蛍光自動ステージモデル（LS850）のモデルがございます。
使い始めには何が必要でしょうか？
本体、操作用のPC、対物レンズが必要です。PC、対物レンズは付属しません。
インキュベーターへの設置に関して、何か準備は必要でしょうか？
必要ございません。本体へはPCからUSBケーブルで電源供給をしますので、インキュベーター前面の扉に挟んで使用可能です。
タイムラプスイメージングのデモについて
Lumascopeは無料にてデモが可能です。実際の実験環境や使用環境でお試しいただき、Lumascopeの機能や性能、使いやすさ、製品の大きさ等を事前にご確認いただけます。デモ可能な機種や貸出期間等につきましてはお問い合わせください。